f=fn/mob

    f: 视场直径，fn：视场数，mob:物镜放大率。
    视场数（field number, 简写为fn），标刻在目镜的镜筒外侧。
    由公式可看出：
    1． 视场直径与视场数成正比。
    2． 增大物镜的倍数，则视场直径减小。因此，若在低倍镜下可以看到被检物体的全貌，而换成高倍物镜，就只能看到被检物体的很小一部份。
六． 覆盖差
    显微镜的光学系统也包括盖玻片在内。由于盖玻片的厚度不标准，光线从盖玻片进入空气产生折射后的光路发生了改变，从而产生了相差，这就是覆盖差。覆盖差的产生影响了显微镜的成响质量。
    国际上规定，盖玻片的标准厚度为0.17mm, 许可范围在0.16—0.18mm.,在物镜的制造上已将此厚度范围的相差计算在内。物镜外壳上标科的确0.17,即表明该物镜要求盖玻片的厚度。
七． 工作距离
    工作距离也叫物距，即指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离。镜检时，被检物体应处在物镜的一倍至二倍焦距之间。因此，它与焦距是两个概念，平时习惯所说的调焦，实际上是调节工作距离。
    在物镜数值孔径一定的情况下，工作距离短孔径角则大。
    数值孔径大的高倍物镜，其工作距离小。
第四章 显微镜的光学附件
    显微镜得不偿失光学部件包括物镜，目镜，聚光镜及照明装置几个部分。各光学部件都直接决定和影响光学性能的优劣，现分述如下：
一．物镜
    物镜是显微镜最重要的光学部件，利用光线使被检物体第一次成象，因而直接关系和影响成象的质量和各项光学技术参数，是衡量一台显微镜质量的首要标准。
    物镜的结构复杂，制作精密，由于对象差的校正，金属的物镜筒内由相隔一定距离并被固定的透镜组组合而成。物镜有许多具体的要求，如合轴,齐焦。
    齐焦既是在镜检时，当用某一倍率的物镜观察图象清晰后，在转换另一倍率的物镜时，其成象亦应基本清晰，而且象的中心偏离也应该在一定的范围内，也就是合轴程度。齐焦性能的优劣和合轴程度的高低是显微镜质量的一个重要标志，它是与物镜的本身质量和物镜转换器的精度有关。
    物镜的种类很多，可从不同的角度分类，现分类介绍。
    根据物镜相差校正的程度进行分类，可分为：
    1．消色差物镜（achromatic ob-jective）: 这是常见的物镜，外壳上常有“ach”字样。这类物镜仅能校正轴上点的位置色差（红，蓝二色）和球差（黄绿光）以及消除近轴点慧差。不能校正其它色光的色差和球差，且场曲很大。
    2．复消色差物镜（apochromatic ob-jective）: 复消色差物镜的结构复杂，透镜采用了特种玻璃或萤石等材料制作而成，物镜的外壳上标有“apo” 字样 ，这种物镜不仅能校正红绿蓝三色光的色差，同时能校正红，蓝二色光的球差。由于对各种相差的校正极为完善，比响应倍率的消色差物镜有更大的数值孔径，这样不仅分辨率高，象质量优而且也有更高的有效放大率。因此，复消色差物镜的性能很高，适用于高级研究镜检和显微照相.
    3．半复消色差物镜（ semi apochromatic objedtive）: 半复消色差物镜又称氟石物镜，物镜，物镜的外壳上标有“fl”字样，在结构上透镜的数目比消色差物镜多，比负消色差物镜少，成象质量上，远较消色差物镜为好，接近于复消色差物镜。平场物镜是在物镜的透镜系统中增加一快半月形的厚透镜，以达到校正场曲的缺陷。平场物镜的视场平坦，更适用于镜检和显微照象。
    4．特种物镜：所谓“特种物镜”是在上述物镜的基础上，专门为达到某些特定的观察效果而设计制造的。主要有以下几种：
   （1） 带校正环物镜（correction collar ob-jective）:
    在物镜的中部装有环装的调节环，当转动调节环时，可调节物镜内透镜组之间的距离，从而校正由盖玻片厚度不标准引起的覆盖差。调节环上的刻度可从0 .11--.023,在物镜的外壳上也标科有此数字，表明可校正盖玻片从0.11—0.23mm厚度之间的误差。
   （2） 带虹彩光阑的物镜（iris diaphragm ob-jective ）:　
    在物镜镜筒内的上部装有虹彩光阑，外方也可以旋转的调节环，转动时可调节光阑孔径的大小，这种结构的物镜是高级的油浸物镜，它的作用是在暗视场镜检时，往往由于某些原因而使照明光线进入物镜，使视场背景不够黑暗，造成镜检质量的下降。这时调节光阑的大小，使背景变黑，使被检物体更明亮，增强镜检效果。
   （3）相衬物镜（phase contrast ob-jective ）:
    这种物镜是由于相衬镜检术的专用物镜，其特点是在物镜的后焦平面处装有相板。
   （4）无罩物镜（no cover ob-jective ）: 有些被检物体，如涂抹制片等，上面不能加用盖玻片，这样在镜检时应使用无罩物镜，否则图象质量将明显下降，特别是在高倍镜检时更为明显。这种物镜的外壳上常标刻ｎｃ，同时在盖玻片厚度的位置上没有０.17的字样，而标刻着“０”。
   （5）长工作距离物镜：这种物镜是倒置显微镜的专用物镜，它是为了满足组织培养，悬浮液等材料的镜检而设计。
二． 目镜
    目镜的作用是把物镜放大的实象（中间象）再放大一便，并把物象映入观察者的眼中，实质上目镜就是一个放大镜。已知显微镜的分辨率能力是由物镜的数值孔径所决定的，而目镜只是起放大作用。因此，对于物镜不能分辨出的结构，目镜放的再大，也仍然不能分辨出。
    由于不同系列目镜光学设计不同，所以不能混用。
三． 聚光镜
    聚光镜又名聚光器，装在载物台的下方。小型的显微镜往往无聚光镜，在使用数值孔径0.40以上的物镜时，则必须具有聚光镜。聚光镜不仅可以弥补光量的不足和适当改变从光源射来的光的性质，而且将光线聚焦于被检物体上，以得到最好的照明效果。
    聚光镜的的结构有多种，同时根据物镜数值孔径的大小 ，相应地对聚光镜的要求也不同 。
    1． 阿贝聚光镜（abbe condenser）
    这是由德国光学大学大师恩斯特。阿贝.(ernst abbe)设计。阿贝聚光镜由两片透镜组成，有较好的聚光能力，但是在物镜数值孔径高于0.60时，则色差，球差就显示出来。因此，多用于普通显微镜上。
    2． 消色差聚光镜(achromatic aplanatic condenser )
    这种聚光镜又名“消色差消球差聚光镜”和“齐明聚光镜”它由一系列透镜组成，它对色差球差的校正程度很高，能得到理想的图象，是明场镜检中质量最高的一种聚光镜，其na值达1.4 。因此，在高级研究显微镜常配有此种聚光镜。它不适用于4 x以下的低倍物镜，否则照明光源不能充满整个视场。
    3． 摇出式聚光镜（ swing out condenser）
    在使用低倍物镜时（如4x），由于视场大，光源所形成的光锥不能充满真整个视场，造成视场边缘部分黑暗，只中央部分被照亮。要使视场充满照明，就需将聚光镜的上透镜从光路中摇出。
    4． 其它聚光镜：
    聚光镜除上述明场使用的类型外，还有作特殊用途的聚光镜。如暗视野聚光镜，相衬聚光镜，偏光聚光镜，微分干涉聚光镜等，以上聚光镜分别适用于相应的观察方式。
四．显微镜的照明装置
    显微镜的照明方法按其照明光束的形成，可分为“透射式照明”，和“落射式照明”两大类。前者适用于透明或半透明的被检物体，绝大数生物显微镜属于此类照明法；后者则适用于非透明的被检物体，光源来自上方，又称“反射式或落射式照明”。主要应用与金相显微镜或荧光镜检法。
    1． 透射式照明
透射式照明法分中心照明和斜射照明两种形式：
   （1） 中心照明：这是最常用的透射式照明法，其特点是照明光束的中轴与显微镜的光轴同在一条直线上。它又分为“临界照明”和“柯勒照明”两种。
    a． 临界照明（critical illumination）:这是普通的照明法。这种照明的特点是光源经聚光镜后成象在被检物体上，光束狭而强，这是它的优点。但是光源的灯丝象与被检物体的平面重合，这样就造成被检物体的照明呈现出不均匀性，在有灯丝的部分则明亮；无灯丝的部分则暗淡，不仅影响成象的质量，更不适合显微照相，这是临界照明的主要缺陷。其补救的方法是在光源的前方放置乳白和吸热滤色片，使照明变得较为均匀和避免光源的长时间的照射而损伤被检物体。
    b． 柯勒照明：柯勒照明克服了临界照明的缺点，是研究用显微镜中的理想照明法。这中照明法不仅观察效果佳，而且是成功地进行显微照相所必须的一种照明法。光源的灯丝经聚光镜及可变视场光阑后，灯丝象第一次落在聚光镜孔径的平面处，聚光镜又将该处的后焦点平面处形成第二次的灯丝象。这样在被检物体的平面处没有灯丝象的形成，不影响观察。此外照明变得均匀。
    观察时，可改变聚光镜孔径光阑的大小，使光源充满不同物镜的入射光瞳，而使聚光镜的数值孔径与物镜的数值孔径匹配。同时聚光镜又将视场光阑成象在被检物体的平面处，改变视场光阑的大小可控制照明范围。此外，这种照明的热焦点不在被检物体的平面处，即使长时间的照明，也不致损伤被检物体。
   （2） 斜射照明：这种照明光束的中轴与显微镜的光轴不在一直线上，而是与光轴形成一定的角度斜照在物体上，因此成斜射照明。相衬显微术和暗视野显微术就是斜射照明。
    2． 落射式照明
    这种照明的光束来自物体的上方通过物镜后射到被检物体上，这样物镜又起着聚光镜的作用。这种照明法是适用于非透明物体，如金属，矿物等。
四． 显微镜的光轴调节
    在显微镜的光学系统中，光源、聚光镜、物镜和目镜的光轴以及光阑的中心必须与显微镜的光轴同在一直线上，所以在镜检前必须进行显微镜光轴的调节，否则不能达到最佳观察效果。
    1． 光源灯丝调节：旧式显微镜需要调节灯泡的位置。目前的新型显微镜的光源已经进行了予定心设置，所以不需要调整。
    2． 聚光镜的中心调整：实际上显微镜光轴的调整的重点即是聚光镜的位置调整。
首先将视场光阑缩小，用10x物镜观察，在视场内可见到视场光阑的轮廓，如果不在中央，则利用聚光镜外侧的两个调整螺钉将其调至中央部分，当缓慢地增大视场光阑时，能看到光束向视场周缘均匀展开直至视场光阑的轮廓象完全与视场边缘内接，说明已经和轴。和轴后再略为增大视场光阑，使轮廓象刚好处于视场外切或略大。
    3． 孔径光阑的调节：孔径光阑安装在聚光镜内，研究用显微镜的聚光镜的外侧边缘上都有科数及定位记号，这样便于调节聚光镜与物镜的数值孔径相匹配，原则上说更换物镜时需调整聚光镜的数值孔径，一般物镜的数值孔径乘0.6或0.8就是聚光镜的数值孔径。
第五章 各种显微镜检术介绍
    前面讲述了显微镜的光学原理以及附件，下面将分类介绍一下各类研究用镜检术。在生物研究领域，透射式明场显微镜得到广泛应用，在此基础上各种特殊的镜检方法也得到应用，如相衬，荧光，干涉，暗场，这些镜检方法在高档显微镜上均能同时实现。
第一节 正立式显微镜
 一． 明视野观察（bright field）
明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式，广泛应用于病理、检验，用于观察被染色的切片，所有显微镜均能完成此功能。在此不再赘述。
二． 暗视野观察（dark field）
    暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同，不直接观察到照明的光线，而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此，视场成为黑暗的背景，而被检物体则呈现明亮的象。
    暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象，微尘在强光直射通过的情况下，人眼不能观察，这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它，由于光的反射，微粒似乎增大了体积，为人眼可见。
    暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。
    暗视野观察的分辨率远高于明视野观察，最高达0.02—0.004mm..
三．相衬镜检法（phase contrast）
    在光学显微镜的发展过程中，相衬镜检术的发明成功，是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色通明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本.
    相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，也就是有效地利用光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察，因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜。
相衬镜检法在装置上与明场不同，有一些特殊要求：
    1． 环状光阑（ring slit）: 装在聚光镜的下方，而与聚光镜组合为一体---相衬聚光镜。它是由大小不同的环形光阑装在一圆盘内，外面标有10x、20x、40x、100x等字样，与相对应倍数的物镜配合使用。
    2． 相板（phase plate）: 装在物镜的后焦平面处，它分为两部分，一是通过直射光的部分，为半透明的环状，叫共轭面；另一是通过衍射光的部分，叫“补偿面”。有相板的物镜称“相衬物镜”，外壳上常有“ph”字样。
相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法，想要得到好的观察效果，显微镜的调试非常重要。除此之外还应注意以下几个方面。
    1． 光源要强，全部开启孔径光阑；
    2． 使用滤色片，使光波近于单色；
四．微分干涉称镜检术（differential interference contrast dic）
微分干涉镜检术出现于60年代，它不仅能观察无色透明的物体，而且图象呈现出浮雕壮的立体感，并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点，观察效果更为逼真。
    1． 原理
    微分干涉称镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等，光束分别在距离很近的两点上通过被检物体，在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小，而不出现重影现象，使图象呈现出立体的三维感觉。
    2． 微分干涉称镜检术所需的特殊部件：
    （1） 起偏镜
    （2） 检偏镜
    （3） 渥拉斯顿棱镜2 块
     3． 微分干涉称镜检时的注意事项
    （1）因微分干涉衬灵敏度高，制片表面不能有污物和灰尘。
    （2）具有双折射性的物质，不能达到微分干涉衬镜检镜检的效果。
    （3）倒置显微镜应用微分干涉衬时，不能用塑料培养皿。
五 荧光镜检术
     荧光镜检术是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体，使之受激发后而产生长波长的荧光，然后观察。荧光镜检术广泛应用于生物，医学等领域。
     1．荧光镜检术一般分为透射和落射式两种类型。
    （1）透射式：激发光来自被检物体的下方，聚光镜为暗视野聚光镜，使激发光不进入物镜，而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮，而高倍则暗，在油浸和调中时，较难操作，尤以低倍的照明范围难于确定，但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。
    （2）落射式：透射式目前几乎被淘汰，新型的荧光显微镜多为落射式，光源来自被检物体的上方，在光路中具有分光镜，所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用，不仅便于操作，而且从低倍到高倍，可以实现整个视场的均匀照明。
     2．荧光镜检术的注意事项
    （1） 激发光长时间的照射，会发生荧光的衰减和淬灭现象，因此尽可能缩短观察时间，暂时不观察时，应用挡板遮盖激发光。
    （2）作油镜观察时，应用“无荧光油”。
    （3）荧光几乎都较弱，应在较暗的室内进行。
    （4）电源最好装稳压器，否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命，也会影响镜检的效果。
目前许多新兴生物研究领域应用到荧光显微镜，如基因原位杂交（fish）等等。
第二节 偏光显微镜（polarizing microscope ）
一．偏光显微镜的特点
    偏光显微镜是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射的物质，在偏光显微镜下就能分辨的清楚，当然这些物质也可用染色发来进行观察，但    有些则不可能，而必须利用偏光显微镜。
    偏光显微镜的特点，就是将普通改变为偏光进行镜检的方法，以鉴别某一物质是单折射（各向同行）或双折射性（各向异性）。
    双折射性是晶体的基本特性。因此，偏光显微镜被广泛地应用在矿物，化学等领域。在生物学和植物学也有应用。
二．偏光显微镜的基本原理
    偏光显微镜的原理比较复杂，在此不作过多介绍,偏光显微镜必须具备以下附件（a）起偏镜 （b）检偏镜 （c）专用无应力物镜（d）旋转载物台。
三． 偏光镜检术的方式
    （一） 正相镜检（orthscope）:又称无畸变镜检，其特点是使用低倍物镜，不用伯特兰透镜（bertrand lens）,同时为使照明孔径变小，推开聚光镜的上透镜。
正相镜检用于检查物体的双折射性。
    （二） 锥光镜检（conoscope）：又称干涉镜检，这种方法用于观察物体的单轴或双轴性。
四． 偏光显微镜在装置上的要求
    （一） 光源：最好采用单色光，因为光的速度，折射率，和干涉现象由于波长的不同而有差异。一般镜检可使用普通光。
    （二） 目镜：要带有十字线的目镜。
    （三） 聚光镜：为了取得平行偏光，应使用能推出上透镜的摇出式聚光镜。
    （四） 伯特兰透镜：这是把物体所有造成的初级相放大为次级相的辅助透镜。
五． 偏光镜检术的要求
    （一） 载物台的中心与光轴同轴。
    （二） 起偏镜和检偏镜应处于正交位置。
    （三） 制片不宜过薄。
第三节 倒置显微镜（inverted microscope）
    前面讲的是正立式显微镜的镜检方式，主要用于切片的观察。而倒置显微镜是为了适应生物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验等显微观察。
    由于上述样品特点的限制，被检物体均放置在培养皿（或培养瓶）中，这样就要求倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长，能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因此，物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来，故称为“倒置显微镜”。
    由于工作距离的限制，倒置显微镜物镜的最大放大率为60x。一般研究用倒置显微镜都配置有4x、10x、20x、及40x 相差物镜，因为倒置显微镜多用于无色透明的活体观察。如果用户有特殊需要，也可以选配其它附件，用来完成微分干涉、荧光及简易偏光等观察。
    目前倒置显微镜广泛应用于patch-clamp ,transgene icsi 等领域。
第四节 体视显微镜（stereo microscope）
    体视显微镜又称“实体显微镜”或“解剖镜”，是一种具有正象立体感地目视仪器，被广泛地应用于生物学、医学、农林、工业及海洋生物各部门。它具有如下地特点：
    1． 双目镜筒中的左右两光束不是平行，而是具有一定的夹角---体视角（一般为12度---15度），因此成象具有三维立体感；
    2． 象是直立的，便于操作和解剖，这是由于在目镜下方的棱镜把象倒转过来的缘故；
    3． 虽然放大率不如常规显微镜，但其工作距离很长
    4． 焦深大，便于观察被检物体的全层。
    5． 视场直径大。
    目前体视镜的光学结构是：由一个共用的初级物镜，对物体成象后的两光束被两组中间物镜----变焦镜分开，并成一体视角再经各自的目镜成象，它的倍率变化是由改变中间镜组之间的距离而获得的，因此又称为“连续变倍体视显微镜”（zoom—stereo microscope）。
    随着应用的要求，目前体视镜可选配丰富的选购附件，如荧光，照相，摄象，冷光源等等。